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一、瓊脂粉基本概述
英文名稱(chēng):Agar;Gelose;2X YT Agar;Gum agar
其他名稱(chēng):瓊脂;洋菜;石花菜;瓊膠;寒天;凍粉;洋粉;洋菜粉;馬康奇氏培養(yǎng)基
CAS號(hào):9002-18-0
分子式:(C12H18O9)n
級(jí)別:BR
凝膠強(qiáng)度:≥1200/㎝2
水不溶物:≤1%
干燥失重:≤8.0%
灼燒殘?jiān)?le;1.0%
淀粉試驗(yàn):不顯藍(lán)
用量:5g/L
性狀:類(lèi)白色或淺黃色粉末。味淡或微有氣味。具黏性。漸溶于熱水中呈凝膠狀,不溶于冷水或乙醇
用途:生化研究。細(xì)菌培養(yǎng)。在電測(cè)量中用以制備“電橋”。比色測(cè)定中用作保護(hù)膠體,以增強(qiáng)有色物質(zhì)懸浮液的穩(wěn)定性。沉淀硅酸
保存:RT
細(xì)菌總數(shù)菌顯色培養(yǎng)基用途:
細(xì)菌總數(shù)菌顯色培養(yǎng)基主要是用于快速檢測(cè)食品、水質(zhì)和環(huán)境中的細(xì)菌總數(shù),細(xì)菌顯紅
色。
大腸桿菌顯色培養(yǎng)基主要是用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大腸桿菌的快速檢測(cè)。大腸桿菌顯藍(lán)綠色,大腸菌群顯無(wú)色,其它菌顯黃色或無(wú)色,革蘭氏陽(yáng)性菌被抑制。
培養(yǎng)基和試劑消毒處理方法
培養(yǎng)基通常采用高壓濕熱滅菌法121 ℃滅菌15分鐘,特殊培養(yǎng)基按使用者的特殊要
求進(jìn)行滅菌(如含糖培養(yǎng)基115 ℃滅菌20分鐘)。
部分培養(yǎng)基(如嗜鹽瓊脂培養(yǎng)基、膽硫乳培養(yǎng)基),只能煮沸滅菌。
對(duì)熱敏感的培養(yǎng)基或添加物質(zhì),應(yīng)采用膜過(guò)濾方法進(jìn)行過(guò)濾除菌。
即用型試劑不需滅菌,應(yīng)參見(jiàn)相關(guān)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)或供應(yīng)商使用說(shuō)明,直接使用。
器具和設(shè)備消毒處理方法
濕熱滅菌:采用高壓滅菌器, 121 ℃滅菌20分鐘,適用于玻璃器皿、移液器吸頭
、塑料瓶等。按照GB 15981 的規(guī)定,評(píng)價(jià)高壓滅菌器的殺菌效果。
干熱滅菌:采用干燥箱滅菌,160 ℃滅菌2h,180 ℃滅菌2h,適用于玻璃器皿,不
銹鋼器具等。
瓊脂粉操作方法和注意事項(xiàng)如下
加水
打開(kāi)滅菌鍋蓋,向鍋內(nèi)加水到水位線(xiàn)。立式消毒鍋?zhàn)詈糜靡阎箝_(kāi)過(guò)的水,以便減少水垢在鍋內(nèi)的積存。注意水要加夠,防止滅菌過(guò)程中干鍋。裝料、加蓋滅菌材料放好后,關(guān)閉滅菌器蓋,采用對(duì)角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋,使蒸汽鍋密閉,勿使漏氣。
排氣
打開(kāi)排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱,待水煮沸后,水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出,當(dāng)有大量蒸汽排出時(shí),維持5min,使鍋內(nèi)冷空氣完全排凈。
升壓、保壓和降壓
當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時(shí),即可關(guān)閉排氣閥,壓力開(kāi)始上升。當(dāng)壓力上升至所需壓力時(shí),控制電壓以維持恒溫,并開(kāi)始計(jì)算滅菌時(shí)間,待時(shí)間達(dá)到要求(一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121℃,20min)后,停止加熱,待壓力降至接近“0”時(shí),打開(kāi)放氣閥。注意不能過(guò)早過(guò)急地排氣,否則會(huì)由于瓶?jī)?nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶?jī)?nèi)液體沖出容器之外。
滅菌后的培養(yǎng)基空白培養(yǎng)
滅菌后的培養(yǎng)基放于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),經(jīng)24h培養(yǎng)無(wú)菌生長(zhǎng),可保存?zhèn)溆;斜面培養(yǎng)基取出后,立即擺成斜面后空白培養(yǎng);半固體的培養(yǎng)基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后,空白培養(yǎng)。
干熱滅菌法
通過(guò)使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱滅菌。一般是把待滅菌的物品包裝就緒后,放入電烘箱中烘烤,即加熱至160~170℃維持1~2h。
干熱滅菌法常用于空玻璃器皿、金屬器具的滅菌。凡帶有膠皮的物品,液體及固體培養(yǎng)基等都不能用此法滅菌。
滅菌前的準(zhǔn)備
玻璃器皿等在滅菌前必須經(jīng)正確包裹和加塞,以保證玻璃器皿于滅菌后不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下:平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內(nèi);三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙,用棉繩以活結(jié)扎緊,以防滅菌后瓶口被外部雜菌所污染;吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心,輕輕捅入管口,松緊必須適中,管口外露的棉花纖維統(tǒng)一通過(guò)火焰燒去,滅菌時(shí)將吸管裝入金屬管筒內(nèi)進(jìn)行滅菌,也可用紙條斜著從吸管尖端包起,逐步向上卷,頭端的紙卷捏扁并擰幾下,再將包好的吸管集中滅菌。
干燥箱滅菌
將包扎好的物品放入干燥烘箱內(nèi),注意不要擺放太密,以免妨礙空氣流通;不得使器皿與烘箱的內(nèi)層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160~170℃并恒溫1~2h,注意勿使溫度過(guò)高,超過(guò)170℃,器皿外包裹的紙張、棉花會(huì)被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿,溫度為120℃持續(xù)30分鐘即可。溫度降至60~70℃時(shí)方可打開(kāi)箱門(mén),取出物品,否則玻璃器皿會(huì)因驟冷而爆裂。
用此法滅菌時(shí),絕不能用油、蠟紙包扎物品。
火焰滅菌
直接用火焰灼燒滅菌,迅速?gòu)氐住?duì)于接種環(huán),接種針或其它金屬用具,可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進(jìn)行滅菌。此外,在接種過(guò)程中,試管或三角瓶口,也采用通過(guò)火焰而達(dá)到滅菌的目的。
結(jié)果
記錄各種不同物品所用的滅菌方法及滅菌條件(溫度、壓力等)。
試述高壓蒸汽滅菌的過(guò)程及注意事項(xiàng)。
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