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一、“大鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA試劑盒”簡介
操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法 | ||
問題 | 可能原因 | 解決方法 |
顯色淡,靈敏度偏低 | 1、試劑盒在運輸途中時間太長,溫度太高 | 盡量縮短運輸時間,夏季應放冰塊降溫 |
2、試劑盒未充分平衡 | 試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋,于室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。 | |
3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃ | 注意培養(yǎng)箱溫度,放入反應板后盡量減少開啟次數以免影響溫度恒定,非隔水式培養(yǎng)箱尤其應注意 | |
4、保溫時間不足 | 校正定時鐘準確定時 | |
5、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增加 | 按說明書要求保留洗滌時間,準確記住洗滌次數 | |
6、移液器吸液量不足,吸嘴內壁掛水太多或內壁不清潔 | 校正移液器,吸嘴要配套,裝吸嘴時要緊密,吸嘴內壁要清潔,最好一次性使用 | |
7、蒸餾水水質有問題 | 使用新鮮合格的蒸餾水 | |
8、底物作用時間不足 | 準確定時 | |
背景深,全部呈有色 | 1、洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留 | 濃縮洗液準確配制;10倍濃縮洗滌液如有結晶則應讓結晶于室溫全部溶解后再量取稀釋;充分洗滌,徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用,不要反復使用,否則易造成污染 |
2、樣品污染 | 樣品應新鮮采集,或低溫保存,防止污染 | |
3、培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應時間過長 | 調整培養(yǎng)箱溫度,準確定時 | |
4、吸嘴重復使用,未洗凈或消毒不徹底 | 吸嘴盡可能一次性使用 | |
5、蒸餾水被污染 | 使用新鮮蒸餾水 | |
6、酶等試劑混用 | 不同批號試劑勿混用 | |
7、一次實驗的標本量過多,加樣時間太長,導致實際反應時間延長 | 合理安排實驗,避免幾塊酶標板同時加樣 | |
重復性不佳 | 1、樣品數量多少不一,加樣時間有長有短 | 重復某一樣品時,加樣時間盡可能與第一次接近 |
2、保溫時間不一致,洗滌條件不一致,操作人員不一致 | 重復測定標本,操作條件、人員等應盡可能與上次保持一致,以排除這些因素造成的不一致的可能性 | |
3、加樣量不一致 | 樣品稀釋前應充分混勻,盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴 | |
出現(xiàn)白板,陽性對照不顯色 | 顯色液變質 | 更換新的顯色液 |
洗滌液配制有誤 | 請按說明書所示稀釋倍數配制 | |
未加酶結合物而認為已加入 | 注意不要漏加 | |
終止液誤作洗滌液稀釋或當底物液使用 | 每次加液前均應看清標簽 |
原創(chuàng)作者:上海恒遠生物科技有限公司
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