ELISA檢測(cè)試劑盒發(fā)展幾十年輝煌當(dāng)真不易
您是從何時(shí)開始知道ELISA試劑盒的呢？相對(duì)國(guó)外來說，雖然很多方面起步的晚，但經(jīng)濟(jì)、科學(xué)、人文的發(fā)展非常迅速�，F(xiàn)在已經(jīng)有很多學(xué)校涉及ELISA實(shí)驗(yàn)了，學(xué)生們?cè)诶蠋煹闹笇?dǎo)下可以學(xué)習(xí)的很快，實(shí)驗(yàn)上手也比較容易。【中國(guó)ELISA檢測(cè)試劑盒】發(fā)展幾十年，而今的輝煌當(dāng)真不易。
一、逐步發(fā)展歷史
● 免疫檢驗(yàn)技術(shù)的出現(xiàn)最早可追溯至19世紀(jì)末。
● 1896年，Widal發(fā)現(xiàn)在傷寒桿菌中加入傷寒病菌人的血清可致傷寒桿菌發(fā)生特異的凝集現(xiàn)象，利用這種凝集現(xiàn)象可有效的診斷傷寒病，這就是最早的用于病原體感染診斷的免疫凝集試驗(yàn)，亦即著名的肥達(dá)試驗(yàn)。
● 1897年，Kraus又發(fā)現(xiàn)將細(xì)菌培養(yǎng)液與其相應(yīng)的抗血清混合后可發(fā)生肉眼可見的沉淀反應(yīng)，于是，免疫沉淀試驗(yàn)又應(yīng)運(yùn)而生。
● 1900年，Landsteiner發(fā)現(xiàn)在一些人的血漿能使另一些的紅細(xì)胞凝集，這種同種凝集現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)，成為人類血型分類的基礎(chǔ)，并由此而衍生了生物科學(xué)中的一個(gè)特殊分支即免疫血液學(xué)，Land—steiner也因人類血型的發(fā)現(xiàn)獲得了1930年的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。
在同一年代，Bordet又發(fā)現(xiàn)了補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，即抗原抗體反應(yīng)后具有補(bǔ)體結(jié)合的能力，如紅細(xì)胞與溶血素反應(yīng)后，如有補(bǔ)體存在即可出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。因此，利用這種免疫溶血機(jī)制做指示系統(tǒng)，可以檢測(cè)另一反應(yīng)系統(tǒng)中抗原或抗體的存在與否。
● 1906年，Wassermann將這種試驗(yàn)用于梅毒螺旋體感染的診斷，建立了著名的華氏反應(yīng)。下面我們首先來看看免疫沉淀反應(yīng)測(cè)定技術(shù)的發(fā)展歷程。
● 1902年，Ascoli建立了環(huán)狀沉淀試驗(yàn)。
● 1905年，Bechhold將抗體混溶在明膠中，然后再將相應(yīng)特異抗原加于其上，酶聯(lián)免疫試劑盒抗原抗體的特異結(jié)合可在明膠中出現(xiàn)沉淀。
● 1946年，Oudin報(bào)道了試管單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)。
● 1965年，Mancini又提出了平板單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)，這種試驗(yàn)的出現(xiàn)使得以前只能進(jìn)行定性測(cè)定的免疫試驗(yàn)進(jìn)入到了定量的時(shí)代，并且其仍是目前最為常用的簡(jiǎn)易抗原定量方法，如免疫球蛋白、補(bǔ)體C3和C4等的測(cè)定。由Ouchterlony首先報(bào)道的平板法雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)，仍然是抗原抗體鑒定的最基本方法之一。
免疫沉淀反應(yīng)發(fā)展到此，基本上可以說是經(jīng)典免疫沉淀試驗(yàn)發(fā)展階段，這些所謂的經(jīng)典免疫沉淀試驗(yàn)不但測(cè)定范圍狹窄、靈敏度低，而且繁瑣費(fèi)時(shí)，不能自動(dòng)化。因此，到了20世紀(jì)70年代，根據(jù)抗原抗體能在液相中快速結(jié)合的原理，出現(xiàn)了微量免疫沉淀試驗(yàn)，即免疫透射比濁測(cè)定、免疫膠乳比濁測(cè)定和免疫散射比濁測(cè)定，這幾種比濁測(cè)定方法均已用于臨床體液特定蛋白含量的測(cè)定，現(xiàn)已有多種自動(dòng)化檢測(cè)儀器應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)，尤其是免疫散射比濁測(cè)定。
二、ELISA實(shí)驗(yàn)所有試劑和檢測(cè)樣本要平衡至室溫后再進(jìn)行加樣操作的原因
為了使所有樣本在一致的溫度下反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測(cè)樣本。避免因溫度的動(dòng)力學(xué)反應(yīng)差異而導(dǎo)致試劑盒檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。
三、【中國(guó)ELISA檢測(cè)試劑盒】實(shí)驗(yàn)為什么必須設(shè)置復(fù)孔？
為獲得更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，強(qiáng)烈建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本進(jìn)行復(fù)孔檢測(cè)，因?yàn)閺?fù)孔檢測(cè)可以：計(jì)算平均值，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確；解決實(shí)驗(yàn)中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；計(jì)算CV值，對(duì)實(shí)驗(yàn)的操作和試劑盒的精密度進(jìn)行評(píng)估。
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