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1. 最新檢測方法
酶可以結合在一抗上,也可以結合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結合。
此外ELISA的結果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學發(fā)光或顯色法檢測等。
如今檢測ELISA有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進行選擇。
一般ELISA檢測的是酶促反應的可溶性產(chǎn)物,抗體上結合有相應的酶(例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP),而反應體系中添加有相應的底物(如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。
這種酶促反應生成具有特征性的顏色,可以通過分光光度計進行檢測,堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。
2. 分析抗體最新類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA試劑盒,實際上有時候二者結合效果更好。例如,對于雙抗夾心法而言,用多抗進行捕獲而單抗進行檢測有時更有幫助。 多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
3. 交叉產(chǎn)生的反應
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應就會影響整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應的一個因素。
盡管現(xiàn)在購買源自指定動物的抗體越來越容易,我們仍有必要確認一下是否會產(chǎn)生交叉反應的問題。在用雙抗夾心法進行ELISA檢測時,檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗,而不能與捕獲抗體起反應。
如果檢測用二抗與捕獲抗體結合,實驗特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗,來避免上述問題。
4、試劑盒的實驗類型
ELISPOT有點像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細胞,然后在膜上檢測細胞分泌的抗原形成斑點。此外,我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進行ELISA實驗。
另有兔、豬、猴、雞、鴨、羊、植物等多種種屬ELISA試劑盒,所有試劑盒經(jīng)過充分驗證,保證有效且重復性佳。
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