閱讀次數(shù)：1811 發(fā)布時(shí)間：2015/3/30 9:04:08
[導(dǎo)讀] 酶聯(lián)免疫學(xué)第三方檢測(cè)中心2015實(shí)驗(yàn)技術(shù)座談會(huì)于2015年3月29日在公司總部(上海)召開。會(huì)中，我公司技術(shù)總監(jiān)歐陽博士根據(jù)多年經(jīng)驗(yàn)講談ELISA實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)要點(diǎn)。據(jù)歐陽博士介紹，應(yīng)用ELISA時(shí)，首先要清楚這幾個(gè)內(nèi)容：① 檢測(cè)抗體還是抗原；② 檢測(cè)的結(jié)果是定性還是定量；③ 是否需要檢測(cè)特異抗體的類型；④ 所用抗體/單克隆抗體的親和力怎么樣。
一、檢測(cè)抗原
最常用于檢測(cè)抗原的方法是非競(jìng)爭(zhēng)性的雙抗體夾心法，其次是競(jìng)爭(zhēng)法。但競(jìng)爭(zhēng)法在具體實(shí)驗(yàn)中有些困難，特別是檢測(cè)微生物的抗原，因?yàn)樾枰獦?biāo)記抗原，這對(duì)于某些抗原是很難做到的，甚至是不可能的。另外在競(jìng)爭(zhēng)法中，酶標(biāo)記的抗原與標(biāo)本直接混合在一起，許多標(biāo)本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質(zhì)，可影響ELISA的結(jié)果。
二、檢測(cè)抗體
檢測(cè)抗體種類常用的方法是檢測(cè)抗體種類的捕獲法，這個(gè)方法常用于檢測(cè)特異性IgG、IgA、IgM。這個(gè)方法的第一步是捕獲所需要檢測(cè)的一個(gè)種類的抗體，接下來是檢測(cè)捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體。間接ELISA在檢測(cè)IgG時(shí)比較簡(jiǎn)單，但不適用于檢測(cè)其他種類的抗體，因?yàn)檠逯腥绻刑禺怚gG存在將與IGM或IgA等競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原。
競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)抗體有兩種方法：一種是將標(biāo)記的抗體和標(biāo)本同時(shí)加入反應(yīng)孔內(nèi)，但標(biāo)記的抗體和標(biāo)本中的抗體必須是結(jié)合抗原的不同決定簇；另一種是先加標(biāo)本，沖洗后再加標(biāo)記的抗體。競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)抗體比間接法容易判斷結(jié)果，并且比較敏感和特異。不論選擇哪種方法，都包括6個(gè)步驟：①抗原或抗體吸附于固相；②加標(biāo)本和試劑；③孵育和沖洗；④加酶標(biāo)抗原或抗體；⑤加適當(dāng)?shù)牡孜�；⑥檢測(cè)和分析結(jié)果。
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