了解這個,您的細胞培養(yǎng)將變得更容易

閱讀次數(shù)：550 發(fā)布時間：2018/5/2 11:13:56

細胞是生物體基本的結(jié)構(gòu)和功能單位，體外細胞培養(yǎng)則是生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥物研發(fā)等多個研究領(lǐng)域的基本環(huán)節(jié)。為了保證實驗結(jié)果的可靠性、一致性、穩(wěn)定性和可重復(fù)性，建立穩(wěn)定一致的培養(yǎng)環(huán)境至關(guān)重要。

細胞培養(yǎng)簡單嗎？
其實做好細胞培養(yǎng)并不簡單！
在細胞培養(yǎng)實驗中，您可能會遇到各種各樣的問題，比如培養(yǎng)基渾濁、沉淀、變色、細胞活力差、產(chǎn)物降解等，現(xiàn)在就和上海恒遠小編一起來找原因、想對策吧。

今天，小編將和大家討論的問題是“培養(yǎng)基渾濁”
無細胞培養(yǎng)基的混濁通常是由于污染、光散射顆粒和聚集體、部分變性或溶解不良的補充劑（如血清或提取物）或者幾種因素共同引起的結(jié)果。渾濁的主要原因是不溶性無機鹽和疏水有機分子，如脂質(zhì)和肽。值得注意的是過濾渾濁培養(yǎng)基會導(dǎo)致聚集組分的流失，而這些組分的流失對培養(yǎng)基性能的影響還未可知。渾濁也可能是死亡細胞或變性細胞衍生產(chǎn)物的脂質(zhì)膜和細胞碎片。

以下問題解決方案主要是針對組分和補充劑造成的渾濁：
可能原因-細胞產(chǎn)品
1.若細胞產(chǎn)生等電點在6.5至8.5范圍內(nèi)的產(chǎn)物，則可能會聚集并導(dǎo)致培養(yǎng)基變渾濁。
解決方案：確定細胞產(chǎn)物的等電點，確保產(chǎn)品不會在生理pH范圍內(nèi)聚集。

2.谷氨酰胺重復(fù)序列大于10的蛋白質(zhì)具有聚集趨勢。
解決方案：確定細胞產(chǎn)生的異源蛋白是否含有自我聚集的模序。

可能原因-提取物：
富含脂質(zhì)物質(zhì)的提取物，如腦提取物，可造成培養(yǎng)基混濁。
解決方案：在使用時再添加提取物，或者使用提取物的替代品；去除提取物中的聚集物質(zhì)并確定其是否仍有效用。

可能原因：脂肪酸
調(diào)配不當?shù)闹舅峥梢宰晕医Y(jié)合。

解決方案：
1.細胞存在時加入α生育酚。
2.添加細胞后再加脂肪酸作為補充劑。
3.脂肪酸與環(huán)糊精或脂質(zhì)體復(fù)合添加。
4.盡量添加含脂肪酸的血清。
5.盡量添加與白蛋白關(guān)聯(lián)的游離脂肪酸
6.盡量添加白蛋白硫辛酸。

可能原因：蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物
蛋白水解產(chǎn)物含有不同疏水性和等電點的肽。當添加到指定pH的培養(yǎng)基中時，某些組分形成聚集體。
解決方案：
1.消除或降低蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物的濃度。
2.嘗試不會造成培養(yǎng)基渾濁的其他蛋白質(zhì)水解物。

可能原因-蛋白質(zhì)和肽：
蛋白質(zhì)及多肽在添加到培養(yǎng)基中時可能是可溶的，但當氧化應(yīng)激或還原劑改變其二級結(jié)構(gòu)并改變其等電點或暴露疏水區(qū)域時，蛋白質(zhì)和多肽會變得不溶或聚集。
解決方案：避免在培養(yǎng)基中產(chǎn)生氧化應(yīng)激的條件。

可能原因-血清
凝血過程完成前冷凍的血清在解凍后加入培養(yǎng)基，隨著過程的繼續(xù)，血清可能變得混濁。
解決方案：解凍后不要過濾血清，讓凝血過程完成。

可能原因-巰基
金屬離子，氧化組分和含巰基分子之間的相互作用可能產(chǎn)生聚集物質(zhì)使培養(yǎng)基變渾濁。
解決方案：避免在培養(yǎng)基中產(chǎn)生氧化應(yīng)激的條件。