微生物為廣泛分布于自然界中的一群肉眼看不到的微小生物，包括細(xì)菌、螺旋體、立克次體、衣原體、支原體、放線菌、真菌、病毒等類，其結(jié)構(gòu)簡單，以單細(xì)胞、細(xì)胞群體或非細(xì)胞狀態(tài)存在，在提供營養(yǎng)物質(zhì)和適宜環(huán)境的條件下，一般都能獨(dú)立生活，迅速生長繁殖。為了避免微生物死亡、污染，保持其原有性狀基本穩(wěn)定，便于研究和使用，需要用到菌種保藏技術(shù)。菌種的保存主要是指通過降低細(xì)菌新陳代謝的速度, 使細(xì)菌的生命活動處于半永久性休眠狀態(tài), 以達(dá)到長期保藏的目的以及減少菌種的更新需求來降低實(shí)驗(yàn)生產(chǎn)成本。微生物菌種的保存方法由于微生物種類的不同而略有差距，接下來給大家介紹一些常見的菌種保存的方法：
1.低溫冷凍保藏法
該方法適合大多數(shù)需要長期保存的微生物，病毒等。原理為在超低溫環(huán)境下時，微生物代謝活動停止，一般溫度越低效果越好。使用凍存管對菌種進(jìn)行保存，同時需要保護(hù)劑，一般使用甘油、脫脂羊粉或者二甲亞砜等保護(hù)劑。講含有菌種的凍存管置于-60~-80℃冰箱中冷凍保存。
2.液體石蠟保藏法
液體石蠟保藏法適用于一些不能分解石蠟的菌類，例如酵母菌、芽孢桿菌屬、青霉屬、曲霉屬等，一些細(xì)菌和真菌并不適合用該方法進(jìn)行保存。液體石蠟法使用液體石蠟覆蓋，微生物代謝被抑制，菌種老化推遲。石蠟法可以防止氧氣進(jìn)入，使得需氧菌無法繼續(xù)生長，同時若培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，容易導(dǎo)致細(xì)菌死亡，石蠟法可防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，延長菌種保存時間。無菌條件下將滅菌的液體石蠟注入剛培養(yǎng)好的斜面培養(yǎng)物上，液面高出斜面頂端1cm~2cm，加膠塞并用固體石蠟封口，使菌種與空氣隔絕。將注人石蠟油的菌種斜面直立存放于低溫（4℃~6℃）干燥處或室溫下保存。
3.冷凍干燥保藏法
該方法適合大多數(shù)微生物的保存，但不適用于不產(chǎn)孢子的絲狀真菌。冷凍干燥保藏法是在低溫、干燥、缺氧條件下保藏菌種。即在低溫條件下快速地將菌種凍結(jié)，使微生物保持完整，然后減壓抽直空使冰升華直至脫水干燥，并在直空狀態(tài)密封隔絕空氣，使微生物代謝活動停止，得以長期保藏。按照一定配方配置保護(hù)劑加入安瓿管，然后再加入菌種制備成菌懸液。先將安瓿管進(jìn)行預(yù)凍存至-15~-20℃，然后用冷凍真空干燥機(jī)對安瓿管進(jìn)行干燥，并將安瓿管進(jìn)行熔封。（低溫避光保存）
4.沙土管保藏法
該方法適合用于產(chǎn)孢類放線菌、芽孢桿菌等的保存，不適合以菌絲發(fā)育為主的真菌和病原性真菌的保藏。使用細(xì)沙土創(chuàng)造干燥條件，使那些能夠產(chǎn)生孢子或芽孢的微生物在干燥環(huán)境中的代謝活動減緩，抑制其繁殖速度，且抵抗力強(qiáng)不易死亡。該方法能減少菌株突變，延長存活時間。將河、海沙用60目過篩，棄去大顆粒及雜質(zhì)，再用80目過篩，去掉細(xì)沙。用吸鐵石吸去鐵質(zhì)，放入容器中用10%鹽酸浸泡，如河沙中右機(jī)物較多可用20%鹽酸浸泡。24h后倒去鹽酸，用自來水浸泡數(shù)次至中性，將沙子烘于或曬干。另取未被污染的地表以下十壤用100日討篩，自來水洗至中性，烘干。按沙：土=2：1混合均勻，分裝人安瓿管或小試管中，高度為1cm左右，塞好棉塞，121℃高壓滅菌1~1.5h，或常壓間歇滅菌3次、每天每次16。在50℃以下烘干（溫度不宜過高，影響菌種性能），經(jīng)檢查無微生物生長方可使用。之后制備菌懸液并將菌懸液加入沙土管中。講含有菌懸液的沙土管放入真空干燥器中進(jìn)行真空干燥。使用火焰封融管口，存放于低溫（4℃~10℃）或常溫干燥處，定期檢查活力及雜菌情況。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
