做ELISA實驗,處理血清問題是關(guān)鍵,很多問題都是息息相關(guān)的,如果一不小心把血清搞砸了,那實驗也得重頭開始了,那么當(dāng)實驗新手使用血清時遇到這些問題應(yīng)該怎么辦,恒遠(yuǎn)建議您淡定些,因為我們會給你奇招吖!
一、怎樣去除沉淀物?
技術(shù)解答:若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
二、FBS部分解凍,該怎么辦?
技術(shù)解答:讓血清完全解凍,輕輕旋轉(zhuǎn)血清瓶, 然后重新冷凍血清。血清質(zhì)量不會受到影響。
三、怎樣熱滅活血清?
技術(shù)解答:血清熱滅活是在水浴56度,保持30分鐘。水位應(yīng)該高于血清水位。在熱滅活過程中,溫度的調(diào)節(jié),通過監(jiān)控含同樣體積的水的參照瓶里的水溫進(jìn)行調(diào)節(jié)。在熱滅活過程必須旋轉(zhuǎn)瓶子每5 分鐘混合一次,確保受熱均勻。使用的溫度計必須經(jīng)過校準(zhǔn)!
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時,推薦使用熱滅活血清。
如果細(xì)胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么黑點的出現(xiàn)可能是因為:
1.配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長。
2.血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果。
3.培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。
4.細(xì)胞生長過老,破碎的細(xì)胞殘骸。
5.配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?蓱(yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點。
好的血清才能讓實驗更加成功,結(jié)果更加精準(zhǔn),所以選擇一個好的血清對您的實驗來說是非常有必要的。如果您在選購血清的時候關(guān)于血清的純度,濃度有任何懷疑的話,那么就來恒遠(yuǎn)吧!我司專業(yè)供應(yīng)優(yōu)質(zhì)血清多年,質(zhì)量和口碑毋庸置疑。
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