IC50值是個什么?您是否一頭霧水呢?不知道沒有關系,小編帶著您一起來看看,這篇干貨很實用哦,記得收藏起來哦,話不多說,請看吧!
IC50值概念
IC50 (half maximal inhibitory concentration)是指被測量的拮抗劑的半抑制濃度。它能指示某一藥物或者物質(抑制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質,比如酶,細胞受體或是微生物)的半量。在凋亡方面,可以理解為一定濃度的某種藥物誘導腫瘤細胞凋亡50%,該濃度稱為50%抑制濃度,即凋亡細胞與全部細胞數之比等于50%時所對應的濃度,IC50值可以用來衡量藥物誘導凋亡的能力,即誘導能力越強,該數值越低,當然也可以反向說明某種細胞對藥物的耐受程度。
基本信息
中文名稱:半抑制濃度
外文名稱:IC50
英文全稱:50% inhibitory concentration
類別:濃度
反應:酶催化反應
關于IC50值計算方法
IC50和EC50的計算一般需要測定5個以上的點,再通過曲線擬合得到函數計算而得,或者假設IC50(EC50)附近的點連成直線計算而得等,但這都存在較大的誤差。因為擬合的函數曲線并不能保證都通過所測定的點,其次IC50(EC50)附近的點并不都連成直線,所以計算誤差較大。IC50(EC50)計算軟件解決了以上問題。本軟件輸入可以為多組試驗數據,軟件將自動取最靠近IC50(EC50)處的三個點進行二次曲線擬合,所建立的函數能完全通過IC50(EC50)附近的3個點,決定系數R2=1.00,并自動生成曲線圖、曲線方程和IC50(EC50)值。支持曲線圖的復制、粘貼及圖上上文字的編輯。在保證試驗數據精度的前提下可以確保在IC50(EC50)周圍的曲線的高精度,由此算得的IC50(EC50)可以保證是高精度的,使用效果很好。
半抑制率
半抑制濃度(或稱半抑制率),即IC50。在間接競爭ELISA標準曲線中是一個非常重要的數據,標準曲線是一個S型曲線。
ICELISA中,不添加抑制物質的對照孔的OD值為B0, 添加了抑制物質的孔的OD值為B。
B/B0% 就叫做結合率, 在結合率為50%時所對應的抑制物質的濃度就叫做IC50。
一般IC50的數值越小,說明你的抗體的特異性能越強!
最小檢測限為試劑盒標準曲線的最小的濃度,小于最小濃度或大于最大濃度,即不在曲線范圍內的都不準確,大于最大濃度可以稀釋后測。
IC50為50%抑制濃度即B/B0=50%時所對應的濃度,半數抑制是用來衡量抗體靈敏度,半數抑制越低,說明抗體的靈敏度越高。
通常來說,試劑盒最大和最小量程應該是該抗體用來檢測標準品的檢測限,檢測限分最大和最小檢測限。
檢測下限一般為理論值,是根據標準曲線算出來的理論上可以檢測到的最小的值;
定量限為實際檢測時可以定量的最低的值;
而最大檢測限就是實際操作中抑制率達到100%時的藥物濃度。
檢測下限(LOD)對應的OD值:OD(LOD) =B0-3SD
定量限(LOQ)對應的OD值:OD(LOQ) = B0-10SD
濃度
如果只是IC50,一個底物濃度就夠了。但是IC50會隨底物濃度的變化而變化,所以你要指定一個底物的濃度,發(fā)表IC50的時候要注明你底物的濃度。這個濃度如果沒有任何依據的隨意指定一個,感覺上就會不專業(yè)。如果你已經有其它人關于這個酶和其它抑制劑的資料(并且上面詳細注明了所用的酶和底物的濃度,還有對底物的Km),你當然可以省事的在其它人的底物濃度下測你的IC50。不過如果你沒有詳細的相關資料或者不很肯定查到的相關數據,最好是先自己做一下這個酶的動力學曲線。具體怎么做動力學找本書上就有了。簡單的就是根據相關資料(新的酶就要看自己的感覺了)設計幾個底物濃度,然后調整加的酶的濃度使得所有速度曲線在引發(fā)后的幾分鐘都是線性的,而且前幾分鐘消耗的底物量一定不要超過底物總濃度的10%。底物的濃度你要高高低低地試幾次,然后估算出Km的大致值(加許多底物讓酶飽和,這個時候測出的速度應該是Vmax, Km就是使得速度為Vmax一半的時候的底物濃度)。然后你設計10~15個底物濃度點上及5倍Km,下及1/5Km,注意Km附近點要密集些因為正是曲線的拐彎處。情況好的話你就會拿到那個酶的Michaelis-Menten曲線(X軸底物濃度Y軸速度),處理后得到Km和Kcat。我覺得最后指定的測IC50的底物濃度要么是Km,要么是3xKm或5xKm(飽和)。
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