在酶聯(lián)免疫實驗中中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。但在這之間我們需要把握的是一個溫度，那就是如何正確的保溫，才能讓酶聯(lián)免疫試劑盒的效果達到zui佳！
酶聯(lián)免疫屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。
這是一個逐步平衡的過程，因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么酶聯(lián)免疫反應總是需要一定時間的溫育。
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結合的合適溫度。在建立酶聯(lián)免疫方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時，產物的生成可達頂峰。
為加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度�？乖贵w反應4℃更為徹底，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜，以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長，在酶聯(lián)免疫中一般不予采用。
若用保溫箱，酶聯(lián)免板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)定的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。
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