血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞的起到某些保護作用。那如何正確的保存血清呢?
正確保存方法
1.生物學實驗中需求長時間保存的血清有必要儲存于-20℃至-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超越1個月。因為血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,有必要預留必定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
2.熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全凍住的血清。生物學實驗中加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活。除非有必要,一般不主張作此熱處理,因為熱處理會構(gòu)成血清堆積物顯著增多,并且還會影響血清的質(zhì)量。補體參與反應有:細胞毒作用,滑潤肌細胞縮短,肥大細胞和血小板開釋組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化。
3.瓶裝血清凍住需采用逐步凍住法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待悉數(shù)溶解后再分裝。生物學實驗中在溶解過程中需不斷悄悄搖晃均勻(當心勿構(gòu)成氣泡),使溫度與成分均一,減少堆積的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃凍住,這樣因溫度改動太大,簡略構(gòu)成蛋白質(zhì)凝集而呈現(xiàn)堆積。
4.一般廠商供給的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清參與培養(yǎng)液內(nèi)一同過濾,切勿直接過濾血清。
5.血清中的堆積物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及凍住后血清中纖維蛋白構(gòu)成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量?捎秒x心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。顯微鏡下“小黑點”:經(jīng)過熱處理過的血清,堆積物的構(gòu)成會顯著增多。有些堆積物在顯微鏡下調(diào)查象“小黑點”,常誤認為血清受污染。一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但假設懷疑血清質(zhì)量,則應當即停止使用,替換另一批號的血清。
6.切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,一同血清中的有效成分會破會而影響血清質(zhì)量。
避免產(chǎn)生沉淀物
1.解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃,實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
2.解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生
3.請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
4.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
5.若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。
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