閱讀次數(shù)：3789 發(fā)布時(shí)間：2018/3/30 9:50:39
近期恒遠(yuǎn)小編收到不少同學(xué)們實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的各種問題。比如加樣不準(zhǔn)，重復(fù)性不好，標(biāo)準(zhǔn)曲線不“標(biāo)準(zhǔn)”，小編在此建議大家，尤其是第一次做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)們，正式實(shí)驗(yàn)之前可先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，在預(yù)實(shí)驗(yàn)中確定稀釋倍數(shù)，節(jié)約又高效。今天恒遠(yuǎn)小編就帶新同學(xué)們簡單了解下ELISA試劑盒總是不成功的原因有哪些及對應(yīng)的解決方法！
ELISA原理：
ELISA是將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。ELISA素來以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，它看似簡單，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果影響較大，如有差錯(cuò)可能會造成實(shí)驗(yàn)的失敗。
ELISA包括三種類型：間接法、夾心法和競爭性法。其中間接法和夾心法較常用。
ELISA試劑盒總是不成功的原因有哪些及對應(yīng)的解決方法！
問題一：標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度差，測定的重復(fù)性差。
可能原因：
1.操作誤差較大，洗液或加液不準(zhǔn)，或酶標(biāo)板不均一；
2.加樣過快，孔間發(fā)生污染；加錯(cuò)樣本；加樣本及試劑時(shí)，加在孔壁；不同批號試劑盒中組分混用；溫育時(shí)間、洗板、顯色時(shí)間不一致；
3.孔內(nèi)污染雜物，血清標(biāo)本未完全凝固即加入，反應(yīng)孔內(nèi)出現(xiàn)纖維蛋白凝固或殘留血細(xì)胞，易出現(xiàn)假陽性等。
解決方法：
1.加樣量多少不一，操作時(shí)間長短不一。重復(fù)同一樣本時(shí)，加樣量與加樣時(shí)間理應(yīng)相同，同時(shí)也應(yīng)注意移液器的校準(zhǔn)。加樣后可輕微晃動酶標(biāo)板使反應(yīng)液充分混合。
2.樣本應(yīng)保證一致、無污染，并應(yīng)該由同一名操作人員進(jìn)行操作。
3.加強(qiáng)操作規(guī)范化，使用質(zhì)量好的酶標(biāo)板。
問題二：不顯色或顯色值低。
可能原因：
1.底物配制問題或底物已失效；
2.酶標(biāo)抗體中酶失活或效率低或漏加酶標(biāo)抗體；
3.抗原抗體不匹配；
4.稀釋度太高；
5.洗板次數(shù)過多，洗滌沖擊力太大。
解決方法：
1.使用高效底物；
2.使用商品化高效的酶標(biāo)抗體；
3.選擇優(yōu)質(zhì)的抗原抗體對；
4.降低稀釋度；
5.按要求洗板，減小洗滌沖擊力。
上海恒遠(yuǎn)生物寄語：
做科研想要得到理想的結(jié)果并不是都能一步做成，每一步細(xì)小的錯(cuò)誤都會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗，但是不能灰心哦，您應(yīng)當(dāng)總結(jié)每一次失敗的教訓(xùn)，不斷與老師交流經(jīng)驗(yàn)和身邊的同學(xué)相互學(xué)習(xí)。從中分析原因，不要放過每一個(gè)細(xì)小的發(fā)現(xiàn)，因?yàn)槟强赡苁菍?shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。此外科研不是兒戲即使步步為營也很難一次使研究得到理想的結(jié)果。我們應(yīng)當(dāng)堅(jiān)守科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度，堅(jiān)持不懈不能輕易放棄！當(dāng)然，選擇恒遠(yuǎn)生物優(yōu)質(zhì)elisa試劑盒即可享受技術(shù)指導(dǎo)及免費(fèi)代測服務(wù)。是您身邊的科研小伙伴哦！
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