閱讀次數(shù)：2579 發(fā)布時(shí)間：2017/10/19 9:31:11
提到ELISA，搞科研的童鞋們都很自信。“不就是最簡(jiǎn)單的抗原抗體反應(yīng)嗎？簡(jiǎn)單”是大多數(shù)童鞋的回答。但就是大家口中最簡(jiǎn)單的免疫反應(yīng)，也掃倒了一大片人��！假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果往往讓這部分童鞋哭笑不得卻又百思不得其解！說(shuō)到這里，上海恒遠(yuǎn)小編就把以往技術(shù)人員解答的經(jīng)驗(yàn)奉上。
樣本處理經(jīng)驗(yàn)：血清是最常用的ELISA標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。
內(nèi)源性物質(zhì)干擾解決方案匯總：
有人認(rèn)為大約 40% 的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig (s) 抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
1、類風(fēng)濕因子人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與 ELISA 系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。解決的辦法是：用F(ab)2 替代完整的IgG、標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）、檢測(cè)抗原時(shí)，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
2、補(bǔ)體ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使C1q可以將二者連接起來(lái)，從而造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：用EDTA稀釋標(biāo)本、用53℃，10 min或56℃，30min 加熱血清使C1q滅活。
3、嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái)，也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig (s) ，但加入量不足或亞類不同時(shí)無(wú)效。
4、嗜靶抗原的自身抗體 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn)，解決的辦法是：測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
5、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體 臨床開展的用鼠源性CD3 等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被 鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig (s) 抗體。這些病人ELISA 測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽(yáng)性。解決的辦法是：測(cè)定抗原時(shí)，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig (s) ，從而克服由于上述原因造成的假陽(yáng)性。
6、交叉反應(yīng)物質(zhì) 類地高辛、類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí)，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
7、標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過(guò)高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過(guò)大等，均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
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