閱讀次數(shù):1947 發(fā)布時間:2017/9/19 10:21:36
什么是“花板”?
所謂“花板”,就是空白、陰陽性對照及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的OD值卻偏高。“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn),往往會給實(shí)驗(yàn)者判讀結(jié)果帶來麻煩。
為了避免“花板”問題的出現(xiàn),降低檢測的假陽性率,獲得更理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在檢測過程中應(yīng)采取下列措施:
1、在選擇elisa試劑盒時,應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便、省時的試劑盒。
2、在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測的過程中,所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)的情況下,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做,排除實(shí)驗(yàn)所用儀器和操作步驟對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
3、血液標(biāo)本應(yīng)置于室溫下1-2h,使血液凝固收縮,然后離心檢測或讓血液過夜后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮,讓標(biāo)本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽性率降至最低。
4、檢測之前,加大離心轉(zhuǎn)速,盡量延長時間,使血細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀,讓血細(xì)胞與血清徹底分離。
5、加樣時不能加入紅細(xì)胞或纖維蛋白,要按照操作說明書去做,否則會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6、對于血清中存在的紅細(xì)胞或纖維蛋白原,可以在加樣前離心時得到控制,同樣也可以通過適當(dāng)增加洗滌次數(shù)和浸泡時間來進(jìn)一步減輕或避免對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。同樣,對于血液存在的非特異性的IgG,增加洗滌次數(shù)和延長浸泡時間也同樣有效。
7、封板溫育時,各孔一定要封嚴(yán),防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
8、孵育時間過長,增加了固相載體吸附非特異性蛋白的可能性,也會造成“花板”。因此,除把握孵育時間外,在加樣過程中也應(yīng)嚴(yán)格控制時間,標(biāo)本較多時可分批操作。
9、手工洗板時應(yīng)注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。
10、用洗板機(jī)洗板時應(yīng)防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
11、洗液的溫度也會影響洗板的干凈程度,尤其是冬天溫度過低時容易出現(xiàn)“花板”問題。
12、洗液要注滿孔,孔壁洗滌不干凈也易造成“花板”現(xiàn)象。
13、洗液要盡量新鮮配制,放置時間過長易產(chǎn)生絮狀物或渾濁,造成堵孔或花板。
14、有些廠家的試劑顯色液不穩(wěn)定,使用前容易變藍(lán),如在實(shí)驗(yàn)前不仔細(xì)檢查,很容易導(dǎo)致“花板”現(xiàn)象的發(fā)生,這也提醒實(shí)驗(yàn)者應(yīng)使用新鮮的顯色液,最大程度的保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
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