閱讀次數(shù)：3160 發(fā)布時間：2017/8/18 9:15:54
優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗板。 酶聯(lián)免疫試劑盒洗板步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在最后一步產(chǎn)生信號。而不充分的洗滌會導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來不理想的結(jié)果。
第二個影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然，洗滌次數(shù)越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會降低信號強度，使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。一般來說，96孔板的每個孔能容納330至460μl。不過，有些自動化洗板機可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個量的洗滌液，比如1ml。它是如何做到的呢？其實很簡單，就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。酶聯(lián)免疫試劑盒這種技術(shù)能增加洗滌量，但不會溢出到其它孔中。
如果您沒有自動洗板機，采用手工洗滌，那么也需要注意幾點。使用8道或12道微量移液器，采用倒吸的方法進行洗滌；不同廠家的洗液不宜相互混用。洗板時需保證微孔板平放，將洗滌液注滿各孔，但盡量避免漏液溢液，以每孔300 µl為宜；板洗次數(shù)一般為3次，要保證洗板的浸泡時間，每次浸泡時間一般為30-60 秒；盡量減少洗液殘留量，推薦每次洗板后進行拍板，并及時更換吸水紙，避免吸水紙的碎屑粘到反應(yīng)孔內(nèi)。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
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