閱讀次數(shù)：1186 發(fā)布時間：2017/7/27 10:05:59
在以往的文章中上海恒遠主要圍繞ELISA試劑盒的抗體抗原，ELISA實驗方法總結等一系列做出了總結。今天上海恒遠分享一篇ELISA實驗標本采集、處理和保存方法大全，希望能幫助到您！
一、ELISA實驗中血清的采集、處理和保存：
1、 真空采血針采集 2ml 新鮮血液，加入無菌試管中
2、 采血后室溫靜置1小時
3、 將采集血液用離心機 4℃，2500rpm離心10 min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。
4、 取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃ 下，可放置保存 24-48 小時； -20℃下，可放置保存 1 個月； -70℃下，可放置保存6個月。
5、 根據(jù)您的實驗需要，取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。 大部分 ELISA 檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以 HRP 為標記的 ELISA 測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。此外還應避免細菌污染，因為菌體中可能含有含有內(nèi)源性過氧化物酶，也會產(chǎn)生假陽性反應。血清標本宜在新鮮 時檢測。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。
二、ELISA實驗中血漿的采集、處理和保存：
1、 真空采血針采集2 ml 新鮮血液，加入無菌試管中。
2、 按 1:9 加入抗凝劑（EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉），30 分鐘內(nèi)于冰上分離血漿以 減少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）
3、 將采集血液用離心機 4℃，2500rpm 離心 5 min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。
4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下，可放置保存 24-48 小時； -20℃ 下，可放置保存 1 個月； -70℃ 下，可放置保存6個月。
5、 根據(jù)您的實驗需要，取適量上清夜進行各種 ELISA測定。 請注意指標說明書上對于抗 凝血劑是否有特殊要求，建議使用 EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其它成份均同等于血清。 注意事項：制備血漿標本需借助于抗凝劑 EDTA, 抗凝不完全的標本因纖維蛋白原干擾而造成假陽性。
三、ELISA實驗中尿液的采集、處理和保存：
1、 采集尿液樣本 500ul，加入無菌試管中。
2、 將采集血液用離心機4℃，2500rpm 離心10 min，，將離心好的樣本留上清，棄下面沉 淀。
3、 取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時； -20℃下，可放置保存1個月； -70℃下，可放置保存6個月。
4、 根據(jù)您的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。
四、ELISA實驗中細胞上清液的采集、處理和保存：
1、采集細胞培養(yǎng)上清液 500ul，加入無菌試管中。
2、將采集血液用離心機 4℃，2500rpm 離心 10 min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。
3、取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃ 下，可放置保存 24-48 小時； -20℃下，可放置保存1個月； -70℃下，可放置保存6個月。
4、根據(jù)您的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。
五、ELISA實驗中細胞裂解液的采集、處理和保存（需要測蛋白濃度）：
1、 取細胞培養(yǎng)板或細胞懸液，用PBS（PH7.2-7.4）洗滌細胞培養(yǎng)板 1-2 次。
2、 通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑（裂解液），使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。
3、 將采集血液用離心機 4℃，2500rpm離心20min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。
4、 取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃ 下，可放置保存24-48小時； -20℃下，可放置保存1個月； -70℃下，可放置保存6個月。
5、 根據(jù)您的實驗需要，取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。
六、ELISA實驗中關節(jié)滑液的采集、處理和保存：
1、 口腔關節(jié)：患者取坐位，常規(guī)消毒后，作皮下及關節(jié)后區(qū)局部浸潤麻醉。然后囑患者大 張口，采用裝有 2 ml 生理鹽水的注射器（5 號針頭）作關節(jié)上腔 穿刺，髁后進針，針尖方向斜向前、內(nèi)、上，抵達關節(jié)結節(jié)后斜面后稍后退，回抽如發(fā)現(xiàn)有淡黃色液體，即表明已進入關節(jié)上腔，注入 2 ml 生理鹽水，反復注入、 回抽五次。 膝骨關節(jié)滑液：無菌穿刺取得關節(jié)液
2、 將關節(jié)液用離心機 4℃，1500rpm離心15min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀
3、 取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?2-8℃下，可放置保存 24-48 小時； -20℃下，可放置保存1個月； -70℃下，可放置保存6個月。
4、 根據(jù)您的實驗需要，取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。
七、ELISA實驗中肺泡灌洗液的采集、處理和保存：
1、 10% 水合氯醛溶液，腹腔麻醉。
2、 打開腹腔，另取10 ml 注射器行下腔靜脈采血，盡可能將血放盡。
3、 在冰面上對左肺進行肺灌洗。取 37℃生理鹽水5 ml，分三次灌洗：2 ml、1.5 ml、1.5 ml 灌洗。回收率在 70% 以上。
4、 將肺泡灌洗液用離心機 4℃，1500rpm 離心 10 min。
5、 取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時； -20℃下，可放置保存1個月； -70℃下，可放置保存6個月。
6、 根據(jù)您的實驗需要，取適量上清夜進行各種 ELISA 測定
八、ELISA實驗中腦脊液的采集、處理和保存：
1、采集腦脊液樣本，加入無菌試管中。
2、將采集血液用離心機 4℃，2500rpm離心10 min，，將離心好的樣本留上清，棄下面沉淀。
3、取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃ 下可放置保存 24-48 小時； -20℃下，可放置保存1個月； -70℃下，可放置保存6月。
4、根據(jù)您的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。
九、ELISA實驗中各類組織勻漿的采集、處理和保存（需要測蛋白 濃度）：
1、 采集組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，剔除附屬的結締組 織，稱取組織塊。
2、 用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86％ 冷生理鹽水，勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應 該是組織塊重量的 9 倍，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時操作要在冰水浴中進行，將盛有組織 的小燒杯放入冰水中）。
3、 勻漿的方式有多種： a) 手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的 1/3 勻漿介質(zhì)或生理鹽水 沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進行勻漿，左手持勻漿管將下 端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動研磨數(shù)十次（6～8 分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。 b) 機器勻漿：用組織搗碎機 10000～15000r/min 上下研磨制成 10％ 組織勻漿，也可用 內(nèi)切式組織勻漿機制備（勻漿時間 10 秒/次，間隙 30 秒，連續(xù) 3～5次，在冰水中進行），皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。
4、 將制備好的10％勻漿用離心機 4℃，3000rpm離心15min，將離心好的勻漿留上清，棄 下面沉淀。
5、 取上清。分裝凍存?zhèn)溆茫?-8℃下，可放置保存24-48小時；-20℃下，可放置保存1個月； -70℃下，可放置保存6個月。
6、 根據(jù)您的實驗需要，取適量上清夜進行各種ELISA測定。
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