閱讀次數(shù)：1542 發(fā)布時(shí)間：2017/4/12 10:36:25
每次面對(duì)新學(xué)期的開始，是不是讓不少ELISA Kit實(shí)驗(yàn)的新手同學(xué)們有點(diǎn)兒手足無措呢？下面一起來看下上海恒遠(yuǎn)生物為您分享的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容吧，四月學(xué)習(xí):最新ELISA Kit技術(shù)資料。
一、DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南：
選擇抗體時(shí)最好選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì)；若選擇兩個(gè)單抗，必須識(shí)別不同表位的抗體；最好從同一家公司選擇抗體對(duì)。ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定最佳信號(hào)和最低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml�？衫脴�(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度，建議放置一個(gè)晚上孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當(dāng)測定混合液體中的抗原時(shí)。
二、ELISA用處：
1. 將酶催化反應(yīng)的放大作用和抗原抗體親和反應(yīng)的高度專一性、特異性相結(jié)合，以酶標(biāo)記的抗原或抗體作為主要試劑進(jìn)行免疫測試，所以具有很高的靈敏度。
2. 實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對(duì)其進(jìn)行定量。
3. 其抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。
4. 為濃縮液，配有稀釋液，稀釋后直接可用，無需另行配置。
三、灰區(qū)的設(shè)置：
通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽性”和“陰性”來報(bào)告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。
四、標(biāo)本復(fù)查：
ELISA手工檢測過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽性標(biāo)本及少見模式的檢測結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
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