在ELISA試驗(yàn)中,洗板是非常重要的過程。酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(elisa)洗滌過程雖不是一個(gè)反應(yīng)過程,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELISA就是通過洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,通過洗滌以清除殘留在微孔板中未能與固相抗原或抗體相結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中的非特異性吸附于固相載體上的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附是普遍的,在ELISA測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附,洗滌時(shí)又應(yīng)將這些非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌掉。在ELISA操作中,洗滌是非常關(guān)鍵的,應(yīng)引起操作者的高度重視。
洗板方法分為兩種,上海今天為大家做出詳細(xì)介紹:
1. 手工洗板方法:按試劑說明書嚴(yán)格操作,稀釋液用蒸餾水按1∶20稀釋濃縮洗液,適量置于臉盆之中。從37 ℃水浴溫箱中拿出溫浴到時(shí)的反應(yīng)板,到洗滌池處,放開自來水約1 min,然后快速甩掉反應(yīng)液,即用自來水沖洗數(shù)次,甩掉水并用干凈的毛巾吸干,放入配好洗滌液的臉盆之中,浸泡5 min~10 min,然后將反應(yīng)板取出,甩掉洗滌液,再用自來水沖洗數(shù)次,用干凈吸水的毛巾拍干(多次)反應(yīng)板。加顯色劑a、b后,振蕩封板,放入37 ℃水浴溫箱10 min,取出,加終止液,振蕩,上酶標(biāo)儀讀板,觀察結(jié)果。按感染性醫(yī)療廢物處理洗滌池的液體及用過的洗滌液:加入健之素(500 mg/片),使其濃度達(dá)到2 500 mg/l,浸泡24 h,收集起來,交醫(yī)療廢物處理公司處理。 1.2.2 洗板機(jī)法 按試劑說明書嚴(yán)格操作,稀釋液用蒸餾水按1∶20稀釋濃縮洗液,適量置于洗板機(jī)洗液瓶里。將反應(yīng)到時(shí)的反應(yīng)板取出,用洗板機(jī)洗板5次,每次浸泡1 min,取出,用干凈的毛巾拍干(多次)反應(yīng)板。加顯色劑a、b后,振蕩封板,放入37 ℃水浴溫箱10 min,取出,加終止液,振蕩,上酶標(biāo)儀讀板,觀察結(jié)果。
2. 自動洗板:按試劑說明書嚴(yán)格操作,稀釋液用蒸餾水按1∶20稀釋濃縮洗液,適量置于洗板機(jī)洗液瓶里。將反應(yīng)到時(shí)的反應(yīng)板取出,用洗板機(jī)洗板5次,每次浸泡1 min,取出,用干凈的毛巾拍干(多次)反應(yīng)板。加顯色劑a、b后,振蕩封板,放入37 ℃水浴溫箱10 min,取出,加終止液,振蕩,上酶標(biāo)儀讀板,觀察結(jié)果。
看完上面的介紹,對于ELISA實(shí)驗(yàn)洗板的兩種操作方法,您都會了嗎?
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