接近年底，有一批科研工作者即將畢業(yè)，上海恒遠(yuǎn)技術(shù)專員為酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)新手入門(mén)的使用技術(shù)報(bào)告做出一番整理，在這里分享給您，供參考。
酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)方法原理
一、雙抗體夾心法測(cè)定抗原
1.將抗原免疫第一種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;
2.加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物;
3.加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體，形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
4.加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體);
5.加底物。底物的降解量＝抗原量。
二、直接法測(cè)定抗原
1.將抗原吸附在載體表面；
2.加酶標(biāo)抗體，形成抗原—抗體復(fù)合物；
3.加底物。底物的降解量＝抗原量。
三、間接法測(cè)定抗體
1.將抗原吸附于固相載體表面；
2.加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物；
3.加酶標(biāo)抗體；
4加底物。 測(cè)定底物的降解量＝抗體量。
酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)操作注意
1. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
2.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
3.底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
4.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
5.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
6.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
8.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
9.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
10.底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
11.加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
12.按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
◎酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)質(zhì)控分析
1.人員培訓(xùn)內(nèi)容包括：①檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理(ELISA試劑盒原理)；②熟悉檢測(cè)技巧，了解易出差錯(cuò)的環(huán)節(jié)及難點(diǎn)；熟悉檢測(cè)試劑性能(包括試劑盒組成，包被片段及其組成)；③熟悉檢測(cè)儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識(shí)；④某些特殊項(xiàng)目的檢測(cè)如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門(mén)組織的專門(mén)培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。
2.基本了解
① 1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)發(fā)展為ELISA試劑盒技術(shù)。
② 特點(diǎn)：ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"。
③ 酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì)，進(jìn)行信號(hào)放大；
④ 有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過(guò)程；
⑤ 靈敏度特異性相對(duì)較高。
⑥ 局限性：只能檢測(cè)到ng水平
⑦ 精密度差(批內(nèi)CV15-20%)；
⑧ 線性范圍窄(一個(gè)數(shù)量級(jí))；
⑨ 存在"HD-HOOK"效應(yīng)。
以上由上海恒遠(yuǎn)技術(shù)人員整理，希望對(duì)做實(shí)驗(yàn)的朋友有所幫助，還需要了解更多詳細(xì)內(nèi)容請(qǐng)查看網(wǎng)站試劑盒說(shuō)明書(shū)或來(lái)電咨詢我們。
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