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Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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解決方案

實(shí)驗(yàn)中常用抗凝劑的配置使用方法解析

閱讀次數(shù):833    發(fā)布時間:2016/5/18 11:03:14

根據(jù)上海恒遠(yuǎn)生物多年的臨床研究經(jīng)驗(yàn)總結(jié)。在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中常需動物的全身抗凝,采出的全血或血漿有的也需加入適當(dāng)?shù)目鼓齽┛鼓鼓齽┑囊笫牵河昧可、溶解度大、不帶進(jìn)干擾實(shí)驗(yàn)的雜質(zhì)。

一、肝素 

(1)肝素抗凝作用原理

肝素的抗凝作用很強(qiáng),作死亡復(fù)蘇等實(shí)驗(yàn)時,常用它作動物全身抗凝劑,肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力,阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用,從而使血液不發(fā)生凝固。

(2)配制和用量

純的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U,10~20U能抗1 ml血液計(jì))。但由于肝素制劑的純度高低以及其保存時間長短不等,因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1%肝素生理鹽溶液,用時取0.1毫升于試管內(nèi),100℃烘干,每管能抗凝5~10ml血液。也可將抽血注射器用配好肝素濕潤一下管壁,直接抽血至注射器內(nèi)而使血液不凝。在動物實(shí)驗(yàn)作全身抗凝時,一般劑量為:大白鼠2.5~3.0mg/200~300g體質(zhì)量,兔10mg/kg體質(zhì)量,狗5~10mg/kg體質(zhì)量。肝素可改變蛋白質(zhì)等電點(diǎn),因此當(dāng)用鹽析法分離蛋白質(zhì)作蛋白質(zhì)各部分的測定時,不可采用肝素。市售的肝素鈉溶液每毫升含肝素12500U,相當(dāng)于100mg。

二、草酸鹽合劑 

(1)原理

草酸胺能使血細(xì)胞略為膨大,而草酸鉀能使血細(xì)胞微縮小,因此草酸銨與草酸鉀按3:2比例配置,可使血細(xì)胞體積保持不變;加福爾馬林則能防止微生物在血中繁殖。此抗凝劑最適于作紅細(xì)胞比積測定。

(2)配制方法及用量

草酸銨1.2g、草酸鉀0.8g、福爾馬林1.0ml、蒸餾水加至100ml每毫升血加草酸鹽合劑0.1ml(即相當(dāng)草酸銨1.2mg,草酸鉀0.8mg)。根據(jù)取血量將計(jì)算好的草酸鹽劑量加入玻璃容器內(nèi)烤干備用。如取0.5ml于試管,烘干后每管可使5ml血不凝固。

(3)注意事項(xiàng)

草酸的作用在于能夠沉淀血凝過程中所必需的鈣離子,而達(dá)到抗凝目的。用時注意加的量應(yīng)適中,不能過多,以免妨礙去蛋白質(zhì)血濾液的制取。不適用于血液內(nèi)鈣或鉀的測定,也不能用于血液非蛋白氮測定。

三、枸櫞酸鈉

常配成3~5%水溶液。也可直接加粉劑,每毫升血加3~5mg,即可達(dá)到抗凝目的。

枸櫞酸鈉可使鈣失去活性,防止凝血。但其抗凝作用較差,堿性較強(qiáng),不宜作化學(xué)檢驗(yàn)之用。僅可用于紅細(xì)胞沉降速度測定。急性血壓測定實(shí)驗(yàn)所用枸櫞酸鈉為5~6%溶液。

四、草酸鉀

(一)原理和注意事項(xiàng)

草酸鉀為最常用的抗凝劑。其與血液混合后可迅速與血液中的鈣離子結(jié)合,形成不溶解的草酸鈣,使血液不凝固。常用于非蛋白氮測定,但不適用于測定鉀和鈣。草酸鹽能抑制乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性,故應(yīng)注意。

(二)配制及使用方法

取草酸鉀10g,加蒸餾水少許使溶解,再加蒸餾水至100ml。配制成10%水溶液,如每管加0.1ml則可使5~10ml血不凝。一般如作微量檢驗(yàn),用血量較少,可配制成2%溶液,如每管加0.1ml可使1~2ml血液不凝。

五、乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)

EDTA對血液中鈣離子有很大的親和力,能與鈣離子絡(luò)合而使血液抗凝。每0.8mg可抗凝1ml血液。除不能用于血漿中鈣、鈉及含氮物質(zhì)之測定外,適用于多種抗凝。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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