閱讀次數(shù)：846 發(fā)布時間：2016/4/21 10:37:29
石蠟切片的優(yōu)點在于可以容易的存放在室溫，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來做原位雜交的的切片，為了防止RNA降解，保存一貫很重要。冰凍切片的優(yōu)點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時不需抗原修復(fù)這一步。缺點是切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮。
冰凍切片由于抗原性保存比較好，所以容易出陽性結(jié)果，但是組織結(jié)構(gòu)形態(tài)的保存沒有石蠟切片佳，而且抗原容易彌散，不易觀察抗原分布情況。石蠟切片由于處理的原因，抗原常被封閉甚至破壞，需要抗原修復(fù)步驟，而且不一定能修復(fù)成功。
如何選擇：
要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，因為作石蠟切片時要高溫烤片，可能會破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，一般可作冰凍切片。
選擇的時候最好同時看看所購抗體的說明書，看其適用于何種切片。若兩種都適合，個人認(rèn)為若染色的目的是為了看組織中有沒有該抗原，可選用冰凍切片，若想了解具體的分布情況，可選擇石蠟切片。
注意事項：
1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致結(jié)晶或抗原封閉。
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使用。
3. 若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。
4. 封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween 20，否則會影響結(jié)果觀察。
5. 如須復(fù)染細(xì)胞核，則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封片。
備注：抗體本身不可能限定一定要用冰凍切片或者一定要用石蠟切片，但抗體對2種切片都能做，這個要根據(jù)老師的目的來選擇。
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