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技術(shù)服務(wù)專(zhuān)區(qū)
酶聯(lián)免疫(ELISA)代測(cè)服務(wù)
ELISA(酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析)是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的..
組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
組織包埋,切片,免疫組化,免疫熒光,偏振光,原位雜交,凋亡,常規(guī)染色,特殊染色,組織形態(tài)圖..
Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應(yīng),先將蛋白通過(guò)SDS-PAGE凝膠電泳分離開(kāi),再利用電場(chǎng)力的作..
解決方案

Elisa試劑盒使用指南賞析

閱讀次數(shù):818    發(fā)布時(shí)間:2016/3/24 11:10:24

ELISA檢測(cè)試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測(cè)相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素(biotin)標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過(guò)PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。
試劑盒使用指南

步驟

常見(jiàn)問(wèn)題

解決方案

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

加樣器不準(zhǔn)確;尤其10ul以下的加樣器,對(duì)結(jié)果影響極大;
保溫設(shè)備不良;
洗滌用水不規(guī)范。

校正加樣器;10ul以下加樣器最好采用進(jìn)口產(chǎn)品(芬蘭、法國(guó)等);
仔細(xì)校正溫度到37,水浴箱為佳;
必須使用去離子水或蒸餾水,不得用自來(lái)水、礦泉水等。
認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書(shū)。

樣品加樣

加樣不準(zhǔn)確;
沒(méi)有混勻。

加樣時(shí)一定要仔細(xì)。加樣后,再檢查,以防漏加、錯(cuò)加。
加樣后,反復(fù)抽吸3次混勻,防止血清聚集孔底,導(dǎo)致非特異性吸附。

洗滌

洗滌不徹底

每次注水洗滌,應(yīng)靜止30秒鐘;
選用吸水紙作為襯墊,每次洗滌后扣干孔內(nèi)水分;
可選用塑料洗滌瓶。

加酶反應(yīng)

漏加

滴加后,認(rèn)真檢查各孔

試劑保存

保存不規(guī)范

一定要在2-8存放。不得過(guò)高,也不得凍存(凍存后,酶液將失效)。

對(duì)照品

對(duì)照品為凍干品

按對(duì)照管標(biāo)示,加入相應(yīng)體積的去離子水或蒸餾水復(fù)溶,充分溶解混勻?砂凑f(shuō)明書(shū)使用。


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