閱讀次數(shù):818 發(fā)布時(shí)間:2016/3/24 11:10:24
ELISA檢測(cè)試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測(cè)相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素(biotin)標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過(guò)PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。
試劑盒使用指南
步驟 | 常見(jiàn)問(wèn)題 | 解決方案 |
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 | 1 加樣器不準(zhǔn)確;尤其10ul以下的加樣器,對(duì)結(jié)果影響極大; | 1 校正加樣器;10ul以下加樣器最好采用進(jìn)口產(chǎn)品(芬蘭、法國(guó)等); |
樣品加樣 | 1 加樣不準(zhǔn)確; | 1 加樣時(shí)一定要仔細(xì)。加樣后,再檢查,以防漏加、錯(cuò)加。 |
洗滌 | 洗滌不徹底 | 1 每次注水洗滌,應(yīng)靜止30秒鐘; |
加酶反應(yīng) | 漏加 | 滴加后,認(rèn)真檢查各孔 |
試劑保存 | 保存不規(guī)范 | 一定要在2-8℃存放。不得過(guò)高,也不得凍存(凍存后,酶液將失效)。 |
對(duì)照品 | 對(duì)照品為凍干品 | 按對(duì)照管標(biāo)示,加入相應(yīng)體積的去離子水或蒸餾水復(fù)溶,充分溶解混勻?砂凑f(shuō)明書(shū)使用。 |
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