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酶聯(lián)免疫(ELISA)代測服務(wù)
ELISA(酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析)是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的..
組織形態(tài)學(xué)實驗技術(shù)服務(wù)
組織包埋,切片,免疫組化,免疫熒光,偏振光,原位雜交,凋亡,常規(guī)染色,特殊染色,組織形態(tài)圖..
Western Blot實驗技術(shù)服務(wù)
Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應(yīng),先將蛋白通過SDS-PAGE凝膠電泳分離開,再利用電場力的作..
解決方案

Elisa實驗顯色與比色

閱讀次數(shù):655    發(fā)布時間:2016/2/26 14:50:54

          TMB 經(jīng)HRP 作用后,約40 分鐘顯色達頂峰,隨即逐漸減弱,至2 小時后即可完全消退至無色。TMB 的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24 小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀,通常指專用于測讀ELISA 結(jié)果吸光度的光度計。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,準(zhǔn)確性為±1%,重復(fù)性達0.5%。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強光照射下,操作時室溫宜在15 -30℃ ,使用前先預(yù)熱儀器 15-30 分鐘,測讀結(jié)果更穩(wěn)定。
     測讀 A 值時,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm 波長。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,第一次在最適波長(W1),第二次在不敏感波長(W2),兩次測定間不 移動ELISA 板的位置,最終測得的A 值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
    肉眼判斷結(jié)果時,顯色淺不易觀察,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性,必須使用酶標(biāo)儀檢測,以保結(jié)果一致性。
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