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技術(shù)服務(wù)專區(qū)
酶聯(lián)免疫(ELISA)代測(cè)服務(wù)
ELISA(酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析)是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的..
組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
組織包埋,切片,免疫組化,免疫熒光,偏振光,原位雜交,凋亡,常規(guī)染色,特殊染色,組織形態(tài)圖..
Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應(yīng),先將蛋白通過SDS-PAGE凝膠電泳分離開,再利用電場(chǎng)力的作..
解決方案

ELISA操作常見問題“加樣”的解決辦法

閱讀次數(shù):1090    發(fā)布時(shí)間:2016/1/7 9:42:38

ELISA

操作常見問題解決辦法

 

ELISA

方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但

ELISA

測(cè)定中影響因素較多,而且

其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引

ELISA

測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:

標(biāo)本因素;

試劑因素;

操作因素。下面就一些

常見

ELISA

操作過程中的問題一一分析。

 


                                                         ELISA操作常見問題“加樣”的解決辦法 
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:①標(biāo)本因素;②試劑因素;③操作因素。下面就Elisa試劑盒中“加樣”操作過程中的問題為您具體分析。 

步驟

可能原因

解決辦法

選  材

選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑(可以看下ELISA試劑盒選購經(jīng)驗(yàn)總結(jié)篇),操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

   

 

 

   

 

1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;

2.手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));

3.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。

 

1.標(biāo)本為血清:最好將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

2.加樣后及時(shí)放入孵箱。

3.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

4.如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

 

5.標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。

在現(xiàn)在的ELISA試劑盒(qmkz.com.cn)中,必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點(diǎn)是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以,有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽性,下次測(cè)定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。 

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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