閱讀次數(shù)：1048 發(fā)布時(shí)間：2015/8/5 10:09:37
小鼠ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。該法適于測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本，干擾小可以測(cè)到每毫升納克水平的細(xì)胞因子（或受體）的水平。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：
①固相的抗原或抗體。
②酶標(biāo)記的抗原或抗體。
③酶作用的底物。
根據(jù)小鼠ELISA試劑盒的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。
（一）雙抗體夾心法。
（二）雙位點(diǎn)一步法。
（三）間接法測(cè)抗體。
（四）競(jìng)爭(zhēng)法。
（五）捕獲法測(cè)IgM抗體。
（六）應(yīng)用親和素和生物素。
小鼠ELISA試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗(yàn). 在這種方法中, 通常標(biāo)準(zhǔn)配體是固定的, 通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵. 通過加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來定量成鍵的受體, 而且最初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測(cè)量. 第二種抗體能識(shí)別抗體的末端, 在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng), 從而使溶液顯色.
小鼠ELISA試劑盒檢測(cè)試劑廠家較多；不同廠家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別，使用質(zhì)劣的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。因此，選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一。
操作技術(shù)的影響
吸量不準(zhǔn)確，直接影響檢測(cè)結(jié)果。因此加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準(zhǔn)。
溫育影響
抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對(duì)溫度有嚴(yán)格要求，酶標(biāo)板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同，造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異；干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。
加樣次序影響
有時(shí)我們?cè)诩訕舆^程中，常常會(huì)遇到個(gè)別標(biāo)本未離心等情況，為了節(jié)約時(shí)間，往往這時(shí)我們會(huì)先加酶結(jié)合物，然后等標(biāo)本分離好后再加標(biāo)本，這樣，竟常常會(huì)造成HBeAb和HBcAb的假陰性。因?yàn)镠BeAb和HBcAb都是競(jìng)爭(zhēng)抑制法，先加入酶標(biāo)記的抗體，首先與固相載體上的抗原結(jié)合，待加入顯色劑后，因酶的存在而顯色，故呈陰性。
綜上所述，對(duì)臨床檢驗(yàn)小鼠ELISA試劑盒測(cè)定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果，要從多方面進(jìn)行分析除試劑因素和操作因素之外，更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分析，并采取相應(yīng)措施排除干擾作用。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
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