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技術(shù)服務(wù)專區(qū)
酶聯(lián)免疫(ELISA)代測服務(wù)
ELISA(酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析)是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的..
組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
組織包埋,切片,免疫組化,免疫熒光,偏振光,原位雜交,凋亡,常規(guī)染色,特殊染色,組織形態(tài)圖..
Western Blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應(yīng),先將蛋白通過SDS-PAGE凝膠電泳分離開,再利用電場力的作..
解決方案

Elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線做不好的原因分析

閱讀次數(shù):1832    發(fā)布時(shí)間:2015/7/13 9:14:34

        上周青島農(nóng)業(yè)大學(xué)徐老師在我公司購買了相應(yīng)的抗體自己包被Elisa試劑盒。由于范老師是位實(shí)驗(yàn)新手,剛剛接觸Elisa實(shí)驗(yàn),研究大鼠干擾素相關(guān)指標(biāo)的實(shí)驗(yàn),做完大鼠γ干擾素Elisa實(shí)驗(yàn)后反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時(shí)候梯度還算明顯,但是顯色比較淺,隨著時(shí)間延長(大概67分鐘)以后梯度就不明顯了。終止反應(yīng)后測得的值梯度就沒有了。

        為此,我公司技術(shù)員對Elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線做不好的原因做出分析:

        1.剛加完顯色劑時(shí)梯度明顯:顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。

        2.酶濃度太高,導(dǎo)致最后顯色結(jié)果都是高的

        3.包被-酶標(biāo)系統(tǒng)不匹配或者酶標(biāo)的非特異反應(yīng)太強(qiáng),或者酶標(biāo)儀讀數(shù)范圍不夠。

        4.樣本中有能夠催化底物的物質(zhì),沒洗下來。

        5.建議:包被、酶標(biāo)重新做梯度,先用較低的濃度把梯度摸索好,然后再優(yōu)化靈敏度,最后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍

        6.有條件的話,可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上,加完底物三分鐘讀數(shù)。

        7.蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話,顯色十分鐘就差不多了。

        8.酶是自己標(biāo)的這種情況的,HRP比例不要太高。

        問題解決后,徐老師對我公司試劑盒的售后服務(wù)非常滿意,并表示下學(xué)期會有新的實(shí)驗(yàn)課題,直接買我公司的進(jìn)口品牌Elisa試劑盒。非常感謝青島農(nóng)業(yè)大學(xué)徐老師對酶聯(lián)免疫學(xué)第三方檢測中心的支持與信賴。

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