閱讀次數(shù):1334 發(fā)布時間:2015/7/1 9:14:27
實驗問題出現(xiàn)之后找到原因就會很容易解決,今天是本月的第一天開始,酶聯(lián)免疫學第三方檢測中心為您帶來了最新技術(shù)分享內(nèi)容。主要是相關(guān)Elisa實驗的一些問題解決,下面一起來看經(jīng)驗講談Elisa試劑盒實驗問題分析方案:
第一、陰性樣本的吸光度值低于陽性吸光度值原因
可能原因是出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象或酶標板孔中的試劑未充分的混合。解決的辦法是注意操作的方法,注意洗滌時的方法、加完試劑后可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30s,混勻液體。
第二、吸光度值偏高是怎么回事
可能引起的原因有孵育的溫度過高、反應的時間過長。相對應的解決辦法是調(diào)整孵育環(huán)境的溫度,如無法調(diào)整室內(nèi)的溫度,請將顯色時間適當?shù)目s短、控制反應時間。
第三、樣品的稀釋
樣品稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性。
ELISA反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應,出現(xiàn)假陽性。因此,國外檢測血清抗體的試劑盒,均規(guī)定將血清稀釋至適當?shù)谋稊?shù),以降低非特異性反應,使特異性的抗原抗體反應充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性。但是,有些用戶未能嚴格按使用說明書操作,如某些產(chǎn)品應取10μl樣品進行稀釋,個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋,由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠,因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準確,檢測結(jié)果出現(xiàn)問題。
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原創(chuàng)作者:上海恒遠生物科技有限公司
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