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Western Blot是利用抗原抗體的免疫反應(yīng),先將蛋白通過SDS-PAGE凝膠電泳分離開,再利用電場力的作..
解決方案

單克隆與多克隆抗體的區(qū)別

閱讀次數(shù):1055    發(fā)布時間:2015/4/29 10:55:50

這首先要從抗體的產(chǎn)生來探討。把某一抗原免疫某種動物而得到單抗或多抗。如果用經(jīng)免疫過的動物的脾細(xì)胞獲得雜交瘤細(xì)胞,則得到單克隆抗體,如果用動物的血清,則得到多克隆抗體。但從理論上說,這些抗體都應(yīng)針對抗原來自的動物,例如如果用抗原免疫小鼠,則這些為鼠抗人。

由于一個大蛋白分子表面具有多種抗原決定簇,因此,免疫動物后,這些不同的決定簇分別誘導(dǎo)動物產(chǎn)生不同的抗體,每種抗體的特異性不同。單抗是有單個細(xì)胞起源的細(xì)胞克隆分泌的,所以只針對蛋白抗原的單一抗原決定簇,而多抗是有多個不同克隆的B細(xì)胞產(chǎn)生的,是多種細(xì)胞的混合物,但其中的每一種抗體也只是針對一種決定簇。多抗混合物中的每一抗體與蛋白抗原結(jié)合的能力是不同的,因此用多抗做實驗與用單抗可有其優(yōu)勢,那就是能確保抗體與抗原結(jié)合從而顯示抗原信息。但也有其缺點,那就是交叉反應(yīng),往往造成假陽性。

從理論上說,用人抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體應(yīng)只能用于人類,但由于動物種屬之間,特別是相近的動物之間,如人與猩猩,大鼠與小鼠存在著同源性,導(dǎo)致抗體的交叉反應(yīng),即用一種動物抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體也可與其它一些動物的抗原反應(yīng)。一般在商品化的產(chǎn)品說明書上都有說明。由于單抗只針對單一抗原決定簇,因此,其能導(dǎo)致的交叉反應(yīng)很少,而多抗是混合物,導(dǎo)致的交叉反應(yīng)就多一些。但并不是向你所認(rèn)為的那樣,多抗可與所有種屬動物反應(yīng)。在選擇抗體時,如果你標(biāo)本來源于人,當(dāng)然應(yīng)選用如鼠抗人或兔抗人等。如果抗體來源確實不清,那應(yīng)該先預(yù)實驗。選擇已知陽性標(biāo)本,在充分設(shè)置陰性對照的前提下,用此抗體染色,看能否顯示陽性結(jié)果。

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