不知不覺新年的第一個(gè)月已經(jīng)過半到中旬，今天上午，我公司黨經(jīng)理接到實(shí)驗(yàn)技術(shù)部發(fā)來的2015最新ELISA方法測(cè)定拓展解說。
我公司具有完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)開發(fā)平臺(tái)，成熟的抗原、抗體研發(fā)系統(tǒng)，熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù)，結(jié)合公司的研發(fā)團(tuán)隊(duì)，可以有效的保證公司產(chǎn)品的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。在最新ELISA方法測(cè)定拓展中，主要介紹了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定傷寒桿菌“O”抗體：
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是用酶標(biāo)記的抗體（或SPA）檢測(cè)未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強(qiáng)。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。本次試驗(yàn)介紹，酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下，見圖：
圖 ELISA－SPA法原理
1. 加抗原 使之吸附于固相載體（如塑料反應(yīng)板）
2. 洗滌 加待測(cè)血清
3. 洗滌 加酶標(biāo)記SpA
4. 洗滌 加酶的底物。經(jīng)酶的催化產(chǎn)生有色產(chǎn)物。
材料：
1. 聚乙烯塑料反應(yīng)板（PH9.6時(shí)可吸附蛋白Ag）
2. 抗原：傷寒桿菌O901煮沸或超聲波粉碎抗原
3. 待測(cè)血清
4. 凍干酶聯(lián)葡萄球菌A蛋白（HRD—proteinA）純品
5. 鄰苯二胺（OPD）
6. 包被液：0.05M碳酸鈉—碳酸氫鈉溶液PH9.6
7. 稀釋液：10%免疫血清PBS—吐溫20，防止非特異性吸附
8. 洗滌液：0.02MTrisTWeen20 ,Ph7.4防止非特異性吸附
9. 底物溶液： 0.02M磷酸氫二鈉25.7毫升
0.1M檸檬酸24.3毫升
蒸餾水50毫升
臨用前新鮮配制，在上述緩沖液中溶解40毫克鄰苯二胺，然后加入30%雙氧水0.15毫升，底物對(duì)光敏感，需要避光并立即使用。
10. 終止液；2M硫酸。
方法：
1．抗原包被
取潔凈的聚苯乙烯微量反應(yīng)板，于每孔內(nèi)加傷寒抗原0.1毫升（用包被緩沖液稀釋，蛋白含量10微克/毫升），置37℃1小時(shí)，棄抗原液，用洗滌液3次每次3分鐘。
2．加待測(cè)血清
于每孔內(nèi)分別加不同稀釋度（如1：5，1：10，1：20…1：80）的待測(cè)血清，PBS空白對(duì)照，陰性對(duì)照血清，陽性對(duì)照血清各0.1毫升。置37℃30分鐘，洗滌3次。
3．加酶聯(lián)A蛋白
于每孔加酶聯(lián)A蛋白各0.1毫升，置37℃20分鐘，洗滌3次。
4．加臨時(shí)配制的底物溶液各0.1毫升，置暗處15分鐘。加2M碳酸1滴終止反應(yīng)。
5.結(jié)果判斷：（肉眼判斷）
若顏色于陰性對(duì)照相同則為陰性，若較陰性對(duì)照深則為陽性，根據(jù)顏色深淺以（+）表示。
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原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
