閱讀次數(shù)：1808 發(fā)布時間：2015/1/6 9:13:50
我公司主要為您提供實驗室科研產(chǎn)品，其中主營產(chǎn)品酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA KIT)可提供免費代測服務。ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體，那么酶聯(lián)免疫實驗代測原理主要有哪些呢？ 我們可以根據(jù)以下幾個方面來分析：
第一、實驗原理
應用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標記抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中濃度。
在ELISA測定方法中，有這幾個必要試劑：
① 固相的抗菌素原或抗體，即免疫吸附劑。
② 酶標記的抗原或抗體，稱為結合物。
③ 酶反應的底物。
第二、定量測定
ELISA操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。
測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線最高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是最理想的檢測區(qū)域。
測定小分子量物質(zhì)常用競爭法，其標準曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負相關。標準曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。
第三、酶聯(lián)免疫試劑盒的基本原理
1.抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水 性部分相互吸附，并保持其免疫學活性；
2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學 和酶學活性；
3.酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反 應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。
酶聯(lián)免疫實驗代測原理中，還包括了其試劑盒產(chǎn)品的作用：
① 將酶催化反應的放大作用和抗原抗體親和反應的高度專一性、特異性相結合，以酶標記的抗原或抗體作為主要試劑進行免疫測試，所以具有很高的靈敏度。
② 實現(xiàn)了在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。
③ 其抗原抗體反應具有高度的特異性。
④ 為濃縮液，配有稀釋液，稀釋后直接可用，無需另行配置。
原創(chuàng)作者：上海恒遠生物科技有限公司
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